摘要

比色试剂盒：选用适配土壤硝酸盐检测的专用试剂盒，检查试剂盒内试剂（提取剂、显色剂 A、显色剂 B 等）是否在有效期内，包装是否完好，无漏液、变色等异常情况。试剂盒需按储存要求（如避光、常温或冷藏）提前取出，平衡至室温后使用，避免温度波动影响试剂活性。

2. 辅助仪器工具：准备电子天平（精度 0.01g，提前校准）、便携式振荡仪（或手动振荡工具）、25mL 比色管（洁净无划痕，提前烘干）、1mL/5mL 移液器（配套吸头，灭菌备用）、恒温水浴锅（精度 ±1℃，提前设定至 25℃）、便携式比色计（提前开机预热，用标准溶液校准），以及土壤采样器、样品袋、研钵、100 目筛、滤纸等样品处理工具。

1. 样品研磨过筛：取混合土壤样品约 100g，自然风干至含水量低于 10%（手感松散，无结块），用研钵研磨后，通过 100 目筛，收集筛下土壤，确保样品均匀，减少颗粒度对提取效率的影响。

2. 样品称量与提取：用电子天平准确称取 5.00g 过筛土壤样品，放入锥形瓶中；用移液器加入 25mL 提取剂，盖紧瓶塞，置于振荡仪上，以 180-200r/min 的速度振荡 15min（若手动振荡，需保持匀速，确保振荡充分）；振荡结束后，静置 5min，用定性滤纸过滤上清液，收集滤液至洁净试管中，作为待测液备用，过滤过程中避免滤纸破损导致杂质混入。

1. 试剂添加：用移液器吸取 2mL 待测液，缓慢注入 25mL 比色管中；依次加入 1mL 显色剂 A、1mL 显色剂 B，每加入一种试剂后，轻轻颠倒比色管 3-5 次，确保试剂与待测液充分混合，避免剧烈振荡产生气泡影响后续比色。

2. 恒温反应：将比色管放入 25℃恒温水浴锅中，水浴保温 10min，严格控制反应时间与温度，温度过高或反应时间不足 / 过长，均可能导致显色过度，影响检测结果。反应期间避免比色管倾斜、碰撞，保持水浴锅水位稳定，没过比色管内液面。

1. 比色计校准：打开便携式比色计，选择土壤硝酸盐检测对应的波长通道（通常为 540nm），用空白溶液（2mL 提取剂 + 1mL 显色剂 A+1mL 显色剂 B，按相同显色步骤处理）进行零点校准，待仪器显示 “校准完成" 后，方可进行样品测定。

2. 样品测定：将显色后的比色管取出，冷却至室温，用擦镜纸擦拭比色管外壁（去除水珠、指纹），放入比色计的比色槽中，确保比色管刻度线对齐卡槽，关闭舱门；仪器自动读取吸光度值，并根据内置标准曲线计算出土壤硝酸盐含量（单位：mg/kg），记录检测结果，每个样品平行测定 3 次，取平均值作为最终结果，若平行样偏差大于 5%，需重新测定。

1. 试剂使用规范：显色剂需按顺序添加，不可颠倒；移液器吸取试剂时，避免吸头触碰容器壁或待测液，防止交叉污染；剩余试剂需密封保存，严禁不同试剂盒内试剂混用。

2. 操作精度控制：样品称量、试剂移取需严格按剂量要求操作，电子天平、移液器需定期校准；比色管使用前需检查是否有划痕，避免影响吸光度读取；振荡提取时，确保所有样品振荡条件一致（速度、时间）。

3. 异常情况处理：若待测液颜色过深（超过比色计量程），需用提取剂稀释（如 1:1 稀释）后重新测定，结果乘以稀释倍数；若显色后溶液出现浑浊，需重新过滤待测液后再次显色；比色计若出现读数不稳定，需检查光源是否正常，或重新校准后测定。